Estabelecimento in vitro de Bambusa oldhamii Munro a partir de matrizes cultivadas a campo e identificação molecular de bactéria endofítica

Resumo

Na micropropagação de plantas, a etapa de estabelecimento é dificultada pela presença de micro-organismos em tecidos oriundos de matrizes do campo, especialmente para bambu. Objetivou-se estabelecer um protocolo eficiente de assepsia de explantes de Bambusa oldhamii oriundos de plantas em campo e efetuar a identificação molecular de um possível isolado bacteriano endofítico. Os explantes foram expostos subsequentemente a álcool 70 %, hipoclorito de sódio 1 % (NaOCl), cloreto de mercúrio 0,1 % (HgCl2), tiofanato-metílico (Cercobin®) e digliconato de clorexidina (Riohex® 2 %), em diferentes combinações, e introduzidos em meio Murashige and Skoog (sólido ou líquido), acrescido ou não de 4 mL L-1 de Plant Preservative Mixture (PPMTM), em sete tratamentos. A assepsia e imersão dos explantes no meio de cultura líquido contendo 4 mL L-1 de PPMTM inibiram visualmente o crescimento de bactérias e fungos, permitiram o desenvolvimento de brotações com comprimento médio de 2,2 cm e posteriores subcultivos, sendo o melhor tratamento usado para o estabelecimento in vitro de B. oldhamii. A identificação molecular da bactéria por meio do sequenciamento do 16S rDNA permitiu identificar o isolado bacteriano como Ralstonia sp., com 100 % de similaridade, e as análises filogenéticas o agruparam com Ralstonia pickettii. Além disso, a bactéria se mostrou sensível a 4 mL L-1 de PPMTM pelo teste de concentração mínima inibitória.

PALAVRAS-CHAVE: Ralstonia, bambu, micropropagação.